|
Thermo Scientific细胞表面蛋白分离试剂盒是一款针对哺乳动物细胞表面蛋白进行选择性生物素标记与纯化的完整套装，能够有效排除胞内蛋白的干扰。 细胞表面蛋白分离试剂盒的特点： • 分离细胞表面蛋白—降低细胞总蛋白分析的复杂度 • 高效回收标记蛋白—可切割的生物素使细胞表面蛋白的回收率接近100% • 便利—独立试剂盒中包含了全部所需试剂以及标记、细胞裂解和纯化细胞表面蛋白的完整说明 • 免疫印迹应用—从SDS-PAGE缓冲液中回收的蛋白可直接加入聚丙烯酰胺凝胶中 • 强劲系统—专为NIH3T3、Hela、C6和A431等多种细胞系设计的实验方案 本试剂盒能够高效地标记一些具有赖氨酸并且充分暴露在胞外的蛋白。在该分离方法中使用了一种不能穿透细胞、可切割的生物素标记试剂(Sulfo-NHS-SS-Biotin)来标记贴壁或悬浮的完整细胞表面上暴露的伯胺基团。之后对处理细胞进行取样和裂解，并使用Thermo Scientific NeutrAvidin琼脂糖树脂对标记的细胞表面蛋白进行亲和纯化。分离得到的细胞表面蛋白在最初标记的伯胺基上附带了小的无活性标签，但不再带有生物素标记（生物素仍结合在树脂上）。本试剂盒包含了完成八次实验（四个长满细胞的T75培养瓶）的充足试剂。 细胞表面蛋白分离试剂盒已成功地被研究人员用于细胞表面蛋白的标记和纯化操作。在一次实验中，使用或不使用Sulfo-NHS-SS-Biotin处理Hela细胞，之后按照试剂盒操作步骤处理细胞样本。收集洗脱液、流出液和凝胶洗脱液，并通过免疫印迹进行分析。从生物素标记的细胞洗脱液中鉴定四种细胞表面蛋白。这些蛋白包括表皮生长因子受体（EGFR）、类胰岛素生长因子-1 beta受体(IGF-1β)、整联蛋白1和整联蛋白5。在对照组中，所有这些蛋白在未处理细胞的洗脱液中均未检出；在流出液中可检测到这些未标记蛋白。对于标记细胞，在流出液中也可观察到某些细胞表面蛋白。这些蛋白可能是由于空间位阻的原因未能实现有效标记。在凝胶洗脱液中存在着极少的目的蛋白，表明针对捕获蛋白的纯化获得了几乎100%的回收率。在全部测试样本的洗脱液中检出了痕量级的热休克蛋白90（Hsp90），说明本操作针对细胞表面蛋白（相比胞内蛋白）具有特异性的标记效果。 |
无参数
微信公众号下单更便捷